酿酒酵母表达中华绒鳌蟹甲壳肽及其抗菌功能研究

摘要

抗菌肽是宿主抵御外来病原入侵时在先天免疫中的重要效应因子。作为一种抗菌蛋白,甲壳动物中的甲壳肽是其先天免疫系统的组成成分。在本研究中,中华绒鳌蟹(Eriocheir sinensis)甲壳肽Crustin(以下简称EsCrustin)在酵母真核系统中表达。先将EsCrustin的ORF克隆到质粒载体pHAC181中,然后通过同源重组技术将重组质粒整合到酿酒酵母菌株GAL1-ScRCH1的GAL1启动子下游以启动表达。重组蛋白在其C末端含有3个HA标签,经Westernblot分析表明重组蛋白MrCrustin的分子量约为20kDa。重组蛋白的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)值分别为0.467-0.921μM和0.887-1.135μM。重组蛋白几乎可以凝集除铜绿假单胞菌外的多种革兰氏阴性及阳性细菌。此外,重组蛋白EsCrustin对嗜水气单胞菌有明显的抑制作用,在琼脂平板上出现较大抑菌圈。以上研究结果表明,本研究中酵母表达的重组蛋白对部分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均表现出抗菌活性。因此,重组蛋白EsCrustin是一种具有杀菌功能的抗菌肽,它在参与甲壳类先天免疫,抵抗病原细菌和病毒的入侵过程中发挥重要作用。