鼠疫耶尔森菌外源获得性pPCP1质粒编码小RNA的筛选、鉴定与功能的初步研究

摘要

目的：鉴定鼠疫耶尔森菌外源获得性pPCP1质粒编码的小RNA，并评价其在生物膜、压力耐受性和毒力方面的功能。方法基于前期鼠疫菌转录组测序结果，分析获得外源性pPCP1质粒编码的高丰度小RNA，提取鼠疫菌总RNA，利用Northern印迹实验验证这些小RNA存在与否。利用λ-Red同源重组技术敲除pPCP1质粒上已证实的小RNA，并对小RNA缺失株在生物膜褶皱形成、高盐耐受性和致病性等方面进行初步的表型筛选。结果与结论 Northern印迹法鉴定了鼠疫菌pPCP1质粒上7个小RNA的存在。在此基础上，获得5个小RNA的缺失突变株，其中sR3446缺失后鼠疫菌生物膜褶皱形成能力减弱；sR3446、sR3457、sR4338和sR4340缺失后鼠疫菌对高盐环境的耐受能力减弱，而sR6143缺失后对高盐环境的耐受能力增强；sR4338和sR4340缺失后鼠疫菌毒力有所减弱。上述结果提示，鼠疫菌外源获得性pPCP1质粒上的小RNA在鼠疫菌应激和致病过程中可能发挥重要作用。