金黄色葡萄球菌Efb蛋白的表达、纯化及功能抗体的制备

摘要

目的:利用大肠杆菌重组表达金黄色葡萄球菌外分泌蛋白Efb(extracellular fibrinogen-binding protein,细胞外纤维蛋白原结合蛋白),检测其生物学活性,并制备其功能性抗体,以探讨Efb蛋白在金葡菌感染中的生物学意义.方法:以金黄色葡萄球菌NCTC-8325菌株基因组为模板,PCR扩增efb基因,构建重组表达载体pET28a-Efb,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,通过Ni柱亲和纯化获得Efb;通过补体激活试验及竞争ELISA的方法检测Efb蛋白的生物学活性,免疫动物制备抗体.结果:获得了纯度较高的重组Efb蛋白,重组蛋白能够有效抑制CH50以及AH50,并且制备了Efb的功能性多克隆抗体.结论:Efb蛋白能够抑制补体激活的经典途径及替代途径,其特异性抗体能够阻断对于补体激活经典途径的抑制作用.