碱性蛋白酶SubC在枯草芽孢杆菌中的高效异源表达

摘要

[背景]碱性蛋白酶是工业用酶中占比最大的酶类,广泛应用于清洁、食品、医疗等行业.近期研究发现碱性蛋白酶在生产生物活性肽方面有巨大潜力,这将进一步拓宽其在保健食品领域中的应用.[目的]利用枯草芽孢杆菌异源表达地衣芽孢杆菌来源的碱性蛋白酶SubC.[方法]通过筛选3种枯草芽孢杆菌宿主菌株(Bacillus subtilis 1A751、MA07、MA08)和6种信号肽(AmyE、AprE、NprE、Pel、YddT、YoqM),同时优化诱导剂浓度、发酵培养基和发酵时长,最终得到最优重组菌株 MA08-AmyE-subCopt.[结果]重组菌株 MA08-AmyE-subCopt 的胞外酶活力为3.33×103 AU/mL,胞外蛋白分泌量为胞内可溶蛋白表达量的4倍,与携带野生型信号肽的对照组菌株WT相比,酶活提高了 73.4％.[结论]异源碱性蛋白酶SubC在枯草芽孢杆菌中成功表达,为碱性蛋白酶SubC的表达和在保健食品领域的工业化应用提供了理论基础.