解纤维梭菌脱水四环素诱导的ClosTron基因打靶系统构建

摘要

[背景]解纤维梭菌是发酵木质纤维素生产乙醇的中温模式菌株,构建可控诱导的基因打靶技术是研究解纤维梭菌遗传调控的重要手段.[目的]在解纤维梭菌中构建脱水四环素诱导的ClosTron基因打靶系统.[方法]首先,分析解纤维梭菌对脱水四环素的敏感性,筛选合适的诱导剂浓度,并以β-葡萄糖苷酶为报告基因,检测其在解纤维梭菌中的诱导效果.然后,将脱水四环素诱导型操纵子与Ⅱ型内含子元件组合,构建脱水四环素诱导的ClosTron质粒.最后,以解纤维梭菌mspI、ldh和ack为例,检测其在解纤维梭菌中的打靶效率.[结果]脱水四环素诱导系统在解纤维梭菌中能够诱导ClosTron元件表达,在mspI、ldh和ack这3个基因位点的打靶效率分别为29.48％± 15.51％、23.61％±7.08％和28.09％±6.97％.[结论]在解纤维梭菌中成功构建脱水四环素诱导的ClosTron基因打靶系统,为梭菌基因工程改造奠定了基础.