在原核细胞中重组人肝刺激因子的表达、纯化及其功能研究

摘要

目的肝刺激因子(hepatic stimulator substance,HSS)在肝细胞中含量甚微、纯化困难,至今未分离到理想的生化纯品。利用DNA重组技术,进行人肝刺激因子(human HSS,hHSS)基因原核表达研究。方法hHSS基因片段经PstⅠ和NdeⅠ消化后,定向插入至pT7-7载体相应位点。转化感受态细菌DH5α,通过限制性酶切图谱分析及DNA测序反应鉴定hHSS基因。再将pT7-7-hHSS表达载体转化到BL21(DE3)中,以IPTG诱导hHSS表达,通过超滤膜及阴离子交换柱纯化,获得目的蛋白,经蛋白印迹杂交及蛋白质肽指纹图谱分析鉴定hHSS。重组hHSS作用于BEL-7402细胞,利用MTT法检测其促增殖作用。结果pT7-7-hHSS正确地表达了hHSS,纯化的rhHSS具促增殖作用,并呈现剂量-效应关系。结论通过构建pT7-7-hHSS原核表达体系,能正确高效地表达hHSS,且具有生物学活性。