人乳头瘤病毒16型E6蛋白真核表达载体pGADT7-E6的构建与鉴定

摘要

目的构建HPV16 E6基因的真核表达载体,为在酵母菌中表达以及进一步探讨HPV16E6基因与宫颈癌发生的关系奠定前期实验基础。方法用PCR扩增含EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的E6基因序列,双酶切pGADT7载体与E6基因PCR产物,纯化回收后,用连接酶将二者连接并转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定,构建HPV16 E6基因的真核表达载体pGADT7-E6。结果双酶切pGADT7-E6后,琼脂糖凝胶电泳显示2个片段,分别在约500 bp与8.0 kb处。DNA测序结果经与GenBank登录的序列做BLAST分析,显示重组质粒含有477 bp的目的基因片段,读码框正确,无碱基错配和移码突变。结论成功构建了HPV16 E6基因真核表达载体pGADT7-E6。