HepG2细胞中PIG11相互作用蛋白质的初步分离与鉴定

摘要

目的探讨人肝细胞癌细胞系(HepG2)并初步鉴定候选肝癌抑癌蛋白肿瘤蛋白P53下游靶基因11号(PIG11)相互作用蛋白,确定PIG11的作用方式。方法课题组前期利用质粒pLXSN构建逆转录病毒载体,转染细胞后建立起PIG11高表达HepG2细胞株。将HepG2分为HepG2对照组,空载体HepG2组和PIG11高表达HepG2组分别培养,流式细胞术检测细胞凋亡。采用免疫共沉淀富集HepG2细胞中PIG11结合蛋白,切取PIG11结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱得到肽序列标签,通过数据库查询蛋白。结果PIG11蛋白高表达组凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。串联质谱后数据库查询鉴定出11个蛋白,分别是热休克蛋白家族中的HSP60,KH型剪接调节蛋白(KSRP)、脑酸溶性蛋白BASP1、蛋白水解诱导因子(PIF/DCD)、Y染色体RNA结合蛋白、碳酸酐酶、白蛋白以及骨架蛋白中的波形蛋白、α、β-微管蛋白、肌动蛋白。结论PIG11蛋白高表达对HepG2具有诱导凋亡作用;初步鉴定出11个PIG11结合蛋白,为进一步阐明PIG11蛋白的作用机制提供线索。