酸性环境对肾小管上皮细胞自噬-溶酶体通路的影响

摘要

目的探讨酸性环境对肾小管上皮细胞(TEC)内自噬-溶酶体通路的影响。方法在体外细胞实验中,利用不同pH值(7.4、7.0、6.6、6.2)培养基培养人TEC(HK-2)。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组细胞的活力;采用蛋白免疫印迹法检测各组细胞内自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ和p62的表达情况,以及溶酶体新生转录因子EB(TFEB)的表达情况;利用串联荧光蛋白质粒tfGal3转染、激光共聚焦显微镜观察,检测各组细胞溶酶体损伤情况。结果MTT检测结果显示,pH 6.6组与pH 6.2组HK-2细胞活力明显低于pH 7.4组[(87.69±9.91)%、(75.06±9.62)%比(100.00±9.59)%](P<0.05)。蛋白免疫印迹法检测结果显示,与pH 7.4组相比,pH 7.0组LC3-Ⅱ表达升高(1.21±0.10比1.00±0.05,P<0.01),而pH 7.0组与pH 6.6组细胞内p62表达均显著下降(0.76±0.03、0.76±0.09比1.00±0.05,P<0.01);pH 6.2组与pH 7.4组培养基内LC3-Ⅱ和p62的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。利用串联荧光蛋白tfGal3转染细胞进行荧光观察发现,与pH 7.4组和pH 7.0组相比,pH 6.6组和pH 6.2组细胞内黄色荧光颗粒增多,红色荧光颗粒则几乎完全消失。蛋白免疫印迹检测结果显示,pH 6.2组细胞内TFEB表达显著低于pH 7.4组和pH 7.0组(0.77±0.10比1.00±0.03、1.04±0.07,P<0.01)。结论酸性环境可能通过干扰自噬-溶酶体通路造成TEC活力下降。