miR-15b靶向ABCC5对K562/A02细胞增殖、凋亡及阿霉素耐药性的影响

摘要

目的 探讨微RNA (miRNA/miR)-15b对K562/A02细胞增殖、凋亡及阿霉素耐药性的影响及其机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测K562和K562/A02细胞中miR-15b表达情况;将体外培养的K562/A02细胞随机分为对照组(正常培养)、miRNA对照(miR-NC)组(转染模拟物阴性对照)和miR-15b组(转染miR-15b模拟物),实时荧光定量PCR检测K562/A02细胞中miR-15b和ATP结合盒转运蛋白C5(ABCC5) mRNA表达,噻唑蓝法检测K562/A02细胞增殖和阿霉素耐药性,流式细胞仪检测K562/A02细胞凋亡情况,双荧光素酶报告基因实验检测miR-15b与ABCC5的靶向关系,免疫印迹法检测K562/A02细胞中ABCC5蛋白表达情况.结果 与K562细胞比较,K562/A02细胞中miR-15b表达水平明显降低[(0.25 ±0.03)比(0.97 ±0.05)] (P ＜0.01).miR-15b组K562/A02细胞miR-15b表达水平及24、48、72 h的细胞增殖抑制率明显高于对照组和miR-NC组(P＜0.05),而miR-NC组与对照组K562/A02细胞中miR-15b表达水平以及24、48、72h的K562/A02细胞增殖抑制率比较差异无统计学意义(P＞0.05).miR-15b组K562/A02细胞凋亡率明显高于对照组和miR-NC组[(23.05±2.85)％比(13.64±2.12)％、(11.58±1.48)％](P＜0.05),而miR-NC组与对照组K562/A02细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P＞0.05).miR-15b组K562/A02细胞增殖抑制率明显高于对照组及miR-NC组(P＜0.05),而miR-NC组与对照组K562/A02细胞增殖抑制率比较差异无统计学意义(P＞0.05).miR-NC组与对照组K562/A02细胞对阿霉素的IC50值比较差异无统计学意义(P ＞0.05);miR-15b组K562/A02细胞对阿霉素的IC50值明显低于对照组和miR-NC组(P＜0.05),其相对于对照组和miR-NC组的逆转倍数分别为2.70倍和2.88倍.各组细胞荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P＜0.01),miR-15b+ ABCC5-WT组细胞荧光素酶活性明显低于miR-NC+ ABCC5-WT组(P＜0.05);miR-NC+ ABCC5-WT组与miR-NC+ ABCC5-MUT组和miR-15b+ ABCC5-MUT组比较差异无统计学意义(P＞0.05);且miR-NC+ ABCC5-MUT组与miR-15b+ ABCC5-MUT组比较差异无统计学意义(P＞0.05).各组细胞中ABCC5蛋白和mRNA表达水平比较差异有统计学意义(P＜0.01),miR-NC组与对照组细胞中ABCC5蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05);miR-15b组细胞中ABCC5蛋白和mRNA表达水平均明显低于对照组及miR-NC组(P＜0.05).结论 miR-15b可能通过抑制ABCC5表达抑制K562/A02细胞增殖,促进其凋亡并降低阿霉素耐药.