RNAi沉默N-cadherin通过MEK-ERK信号通路抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移及上皮-间质转化过程

摘要

目的探讨沉默神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)对卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移与上皮-间质转化的影响及分子机制。方法收集2021年3月~2021年12月我院卵巢癌患者手术切除的卵巢癌组织与邻近癌旁正常组织,采用免疫组织化学染色检测N-cadherin蛋白表达。通过RNAi技术沉默卵巢癌细胞SKOV3细胞中N-cadherin的表达后分为空白对照组、空载体组、siRNA-N-cadherin组。CCK-8法、细胞克隆形成实验、流式细胞术分别检测各组细胞增殖活性、克隆形成能力以及细胞周期分布,Transwell实验和细胞划痕实验分别检测各组细胞侵袭与迁移能力,实时荧光定量PCR检测各组细胞中N-cadherin、上皮性钙粘附分子(E-cadherin)mRNA表达,免疫细胞化学染色检测各组细胞中N-cadherin、E-cadherin、基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)蛋白表达,Western blot检测各组细胞中MEK、ERK蛋白表达。结果与癌旁正常组织比较,卵巢癌组织中N-cadherin呈高表达(P<0.05)。与空白对照组和空载体组比较,沉默N-cadherin能够抑制SKOV3细胞增殖活性(P<0.05),细胞克隆形成数目下降(P<0.01),并使细胞发生S期阻滞(P<0.01),细胞侵袭数目和迁移数目均减少(P<0.01);此外,沉默N-cadherin后SKOV3细胞中N-cadherin mRNA相对表达量下降,E-cadherin mRNA相对表达量升高(P<0.05),细胞内N-cadherin、MMP2和MMP9蛋白阳性染色减弱,E-cadherin蛋白阳性染色增强,细胞中MEK、ERK的蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论沉默N-cadherin可抑制卵巢癌细胞活性、细胞克隆形成、侵袭、迁移与上皮-间质转化的能力,使细胞阻滞于S期,其机制可能与阻碍MEK、ERK信号通路有关。