子宫平滑肌肉瘤组织EphA2/EphrinA1表达及沉默EphA2对肿瘤细胞生长与RelA/p65磷酸化的影响

摘要

目的探究生促红素肝细胞受体A2(EphA2)及其配体(EphrinA1)在子宫平滑肌肉瘤组织中的表达情况,通过沉默EphA2探究其对肿瘤细胞生长及RelA/p65磷酸化的影响。方法以重庆市中医院28例子宫平滑肌肉瘤患者为研究对象,免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测子宫平滑肌肉瘤与瘤旁组织中EphA2、EphrinA1mRNA表达;通过脂质体介导法将EphA2-siRNA转染至SK-UT-1细胞以沉默EphA2表达,同时以正常培养的细胞作为正常组、转染NC-siRNA的细胞作为阴性对照组(NC-siRNA组);qRT-PCR和Western blot检测细胞中EphA2表达,以确定转染效率;CCK-8法、Transwell小室实验检测细胞增殖活性、迁移与侵袭;TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫荧光染色检测细胞内p65表达变化;Western blot检测RelA/p65磷酸化位点蛋白表达水平。结果子宫平滑肌肉瘤组织中EphA2、EphrinA1 mRNA与蛋白表达水平均显著高于瘤旁组织(P<0.05);与空白对照组比较,EphA2-siRNA组细胞在转染24、48及72 h后的增殖活性下降,细胞迁移与侵袭数目均减少,TUNEL阳性染色细胞率增加,细胞凋亡率增加,p65绿色荧光强度明显减弱,同时,p53蛋白表达升高,RelA/p65 Ser536和RelA/p65 Ser276磷酸化蛋白水平降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论EphA2与EphrinA1在子宫平滑肌肉瘤组织中呈高表达,靶向沉默EphA2表达可抑制子宫平滑肌肉瘤细胞增殖与转移,诱导细胞发生凋亡,并抑制RelA/p65的Ser536和Ser276位点磷酸化。