人乳头瘤病毒16L1-E5表达质粒的构建及其蛋白表达

摘要

目的 构建人乳头瘤病毒16L1-E5的原核表达质粒,并进行表达融合蛋白,为下一步探讨该蛋白是否能作为疫苗的研究作准备.方法 以本室已构建好的阳性质粒pET32(+)/HPV16 E5为模板,PCR获得E5基因,经SalⅠ和NotⅠ双酶切插入已构建好的pGEx4T-1/HPV16L1,通过筛选获得正确的阳性克隆pGEX4T-1/HPV16L1-E5.pGEX4T-1/HPV16L1-E5转化入BL21感受态细胞,经IPTG诱导进行目的 蛋白的表达,通过测定不同时间、不同IPTG浓度和不同温度时目的 蛋白表达情况,获得蛋白表达的最佳条件,SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达.结果 成功构建了质粒pGEX4T-1/HPV16L1-E5,在1mmol/L IPTG、34℃、4h诱导获得最大量的目的 蛋白表达.结论 成功构建的pGEX4T-1/HPV16L1-E5质粒能表达出目的 蛋白,为进一步研究目的 蛋白功能打下了坚实的基础.