人MD-2/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达

摘要

构建人髓样分化蛋白-2(human myeloid differentiaton protein-2,hMD-2)与谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione-S-transferase,GST)的融合蛋白(hMD-2/GST)表达载体PGEX-4T-1/hMD-2,在大肠杆菌中融合表达hMD-2/GST.以真核表达载体PEF-BOS/hMD-2为模板,用PCR法在MD-2编码序列上下游引入酶切位点和终止密码子;将hMD-2编码序列克隆入原核表达载体PGEX-4T-1的相应酶切位点;用PCR和酶切筛选、鉴定重组质粒PGEX-4T-1/hMD-2,并对插入基因片断测序;重组质粒PGEX-4T-1/hMD-2转化大肠杆菌,经IPTG诱导后用SDS-PAGE分析表达产物.结果PCR、酶切鉴定和序列测定证实MD-2编码序列正向插入原核表达载体PGEX-4T-1的相应酶切位点,片断与PCR扩增产物大小相同、序列无误、阅读框架正确;SDS-PAGE证实hMD-2/GST在大肠杆菌中表达,表达量约占菌体总蛋白的30%.说明成功构建了PGEX-4T-1/hMD-2载体,hMD-2/GST融合蛋白在大肠杆菌中得到初步表达,为MD-2后续研究作了必要的准备.