miRNA-133b-3p对PC12细胞P2rx4的表达调控及细胞钙活动的实验观察

摘要

目的:从离体细胞水平观察miRNA-133b-3p调控P2rx4表达对神经元钙活动的影响.方法:用转染试剂将miRNA-133b-3p mimic和miRNA-133b-3p inhibitor转入PC12细胞中.转染48 h后,用荧光定量PCR的方法检测PC12细胞中miRNA-133b-3p的含量,P2rx4 mRNA的表达变化;用免疫印迹的方法检测P2rx4受体蛋白的表达变化;用胞内钙成像技术检测ATP孵育后细胞中钙离子浓度的变化.结果:转染48 h后,与阴性对照组相比,加入miRNA-133b-3p mimic后PC12细胞中miRNA-133b-3p的含量明显增加,P2rx4 mRNA和P2rx4蛋白的表达减少,ATP孵育后细胞中钙离子浓度的升高明显减弱.转染inhibitor后,细胞内miRNA-133b-3p的含量明显减少,P2rx4 mRNA和P2rx4蛋白的表达增加,ATP孵育后胞内钙离子浓度的升高明显增强.结论:miRNA-133b-3p通过负向调控P2rx4的表达来影响细胞钙活动.