利用IgA蛋白酶β结构域为骨架构建细菌表面展示随机肽库

摘要

以IgA蛋白酶β结构域为骨架构建细菌表面展示随机肽库.设计合成两条寡核苷酸双链,链1含有一个随机编码序列(NNK)10其3'端可与链2互补.通过两条链的退火、延伸、酶切、回收后与酶切、去磷酸化的载体以最佳连接比连接,采用酚:氯仿抽提去除残留的连接酶,分批进行电转化,获得一库容量为5×106的随机肽库.随机挑选10个克隆进行测序,结果显示所构建肽库的基本框架与预期设计相符,四个寡核苷酸出现的频率也与理论值相接近,表明所构建的随机肽库是成功的.