天花粉蛋白胰酶肽图谱的毛细管区带电泳法分析

摘要

目的:以天花粉蛋白胰蛋白酶解肽段为测定对象,用毛细管区带电泳法(CZE)研究天花粉蛋白的肽图谱分离条件.方法:采用未涂层石英毛细管(长50 cm,内径75 μm,有效长度42 cm),以50 mmol/L磷酸盐和150 mmol/L三氟乙酸溶液为运行缓冲液,在25℃、pH2.0和压力为3 447.4 Pa(×10 s)的条件下进样,以12 kV恒压电泳分离,检测波长214 nm.结果:运用CZE也能较好地对天花粉蛋白进行肽图谱分离,在缓冲体系中加入离子对试剂三氟乙酸,可极大地改善多肽的峰形和分辨率;同时运用反相高效液相色谱(RP-HPLC)技术,也很好地鉴定了部分肽段在CZE和RP-HPLC肽图谱中的对应关系.结论:与传统的RP-HPLC分析天然或重组蛋白肽图谱相比,CZE也不失为一种鉴定蛋白肽图谱的有效、快速和简单的方法.