可表达随机12肽库的逆转录病毒表达系统的建立及评价

摘要

目的:建立可表达随机12肽库的逆转录病毒表达系统.方法:体外合成编码随机12肽的DNA片段;在最优化的实验参数和反应条件下将DNA片段克隆入带有EGFP标记的逆转录病毒载体后分批次电击转化大肠杆菌,合并转化所得菌液即为可表达随机12肽库的逆转录病毒原始载体库;半固体扩增法扩增该原始载体库,提取质粒并转染GP2-293包装细胞.在EGFP表达最强的时间点收集细胞培养上清,即为可表达随机12肽库的逆转录病毒库.结果:可表达随机12肽库的逆转录病毒原始载体库的库容量为3.14×106 cfu;扩增后的逆转录病毒载体库滴度为5.2×109 cfu/mL,库容量为2.34×1011cfu;转染了已扩增的载体库质粒后的GP2-293包装细胞可以成功地表达随机12肽库.结论:建立了可表达随机12肽库的逆转录病毒表达系统,为抗病毒寡肽的筛选以及进一步的深入研究奠定了良好的基础.