DNA损伤检查点蛋白调节子1片段的表达纯化及抗体制备

摘要

目的:原核表达、纯化DNA损伤检查点蛋白调节子1(MDC1)片段,并制备其多克隆抗体.方法:设计特异引物,通过RT-PCR扩增编码MDC1 N端194个氨基酸残基的基因片段,测序正确后插入含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性.结果:原核表达并纯化了MDC1 N端片段,并获得了抗MDC1的多克隆抗体,抗体效价达到1:12 800,Western印迹显示该抗血清能特异识别原核及真核细胞表达的MDC1.结论:MDC1 N端片段能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究MDC1在Fhit特异信号通路中的作用奠定了基础.