人自噬相关基因5真核表达载体的构建及表达鉴定

摘要

目的:构建带Flag标签的自噬相关基因5(ATG5)的真核表达载体,获得Flag-ATG5融合蛋白.方法:以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增人ATG5编码序列,将其插入pcDNA3-Flag载体,转染人胚肾293T细胞后,Western印迹检测其表达情况;将该重组质粒与ATG12表达质粒共转染293T细胞,通过免疫共沉淀法检测2个蛋白的相互作用.结果:Flag-ATG5真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后融合蛋白获得表达,其相对分子质量约33× 103;Flag-ATG5可与Myc-ATG 12结合.结论:构建了带Flag标签的入ATG5真核表达载体,为进一步研究ATG5在自噬中的功能奠定了基础.