人性激素结合球蛋白的真核表达、纯化鉴定及质控品应用分析

摘要

目的 构建人性激素结合球蛋白(SHBG)的重组真核表达载体,获得高纯度的人SHBG重组蛋白.方法 根据人SHBG基因序列,利用Primer Premier 6.0设计引物,扩增获得人SHBG基因;构建人SH-BG-pCMV3H重组真核表达载体;将其转染至HEK-293F细胞,提取人SHBG重组蛋白,并用ConA柱亲和层析法纯化;采用人S HBG检测试剂盒对其蛋白浓度进行鉴定.结果 人S HBG基因产物长度与预期一致,约为1200 bp;测序比对分析结果显示人SHBG基因成功插入pCMV3H载体;电泳结果显示在相对分子质量约为42×103处有一明显条带,与预期蛋白质位置一致;人SHBG检测试剂盒鉴定结果显示人SHBG重组蛋白作为质控品与西门子、安图生物、罗氏一致性良好;含钙离子缓冲液中人S HBG重组蛋白稳定性优于不含钙离子缓冲液.结论 真核表达人SHBG重组蛋白能够作为SHBG检测试剂的质控品,且各厂家检测一致性良好;钙离子有利于提升人SHBG蛋白的稳定性.