不同DNA提取方法及Taq酶浓度对人白细胞抗原-B27基因分型结果的影响

摘要

目的 探讨两种DNA提取方法(加热法、盐酸胍法)及不同浓度Taq酶对人白细胞抗原(HLA)-B27基因分型结果的影响.方法 经柠檬酸右旋糖液抗凝的全血7人份,对比用加热法和盐酸胍法提取的DNA进行HLA-B27基因分型效果的差别;选取上述阴、阳性标本各1份,以Taq酶作浓度梯度试验,用浓度分别为每50微升0.3、0.6、1.2、2.4、4.8、7.2 U 6个梯度进行对比试验,摸索出HLA-B27基因分型试验中所需的最佳Taq酶浓度.结果 用盐酸胍法所提取的DNA在HLA-B27基因分型实验中能达到很好的效果,而加热法的内对照不清晰.Taq酶浓度在0.3 U/50 μL时条带不清晰,在7.2 U/50 μL时阴性标本易产生非特异性条带.结论 盐酸胍法提取DNA优于加热法.不同实验室应根据自身条件确定最佳反应条件及Taq酶浓度.