泰泽病原体nested-PCR检测方法的优化及应用研究

摘要

目的 对泰泽病原体nested-PCR检测方法进行优化和应用研究.方法以感染泰泽病原体RJ株的大鼠肝组织作为阳性对照,按国标GB/T 14926.10-2008<实验动物泰泽病原体检测方法>间接免疫荧光检测(IFA)呈阳性的上海地区大鼠肝组织为材料,对本室已建立的泰泽病原体nested-PCR检测方法中的DNA抽提方法和PCR过程进行优化,并应用于22只免疫抑制实验动物的泰泽病原体检测.结果 肝脏组织DNA以酚/氯仿抽提法为好:nested-PCR出现196 bp的特异性条带,此方法的敏感性达1pg;产物纯化后进行测序比对分析显示,上海地区实验大鼠感染样品以及RJ株感染样品的序列均与Genbank中泰泽病原体16S rRNA(Genbank D14638.1)的同源性为100%.应用研究表明,22个样品中IFA检测阳性样品8个,阳性率为36.4%:Nested-PCR检测阳性样品13个,包含所有的IFA阳性样品,阳性率为59.1%.结论 本方法灵敏度高,特异性强,经进一步应用改进后,可用于泰泽病原体的检测.