人附睾蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

摘要

目的:构建人附睾蛋白(HE4)原核表达载体,获得HE4蛋白并对其初步鉴定.方法:优化合成含有两个WAP结构域的HE4基因序列并与载体pET32a(+)连接,构建质粒pET32-HE4,将其转入BL21(DE3)菌中,IPTG诱导表达HE4蛋白.采用镍离子亲和层析法纯化HE4蛋白,Western blot法和SDS-PAGE鉴定HE4蛋白.结果:合成的HE4基因序列产物大小288 bp,双酶切鉴定及测序结果显示成功构建BL21-pET32-HE4表达菌,SDS-PAGE结果显示该蛋白相对分子质量约为30000,符合预期.37℃条件下0.2 mmol/L IPTG诱导3 h时HE4蛋白表达量较大.纯化获得了HE4蛋白,经Western blot鉴定有HE4抗原性.结论:成功制备了HE4蛋白.