幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白与麦芽糖结合蛋白融合表达产物rMBP-NAP的分离纯化

摘要

目的:从E.coli TB1(pMAL-c2x-napA)细菌中分离纯化与麦芽糖结合蛋白融合表达的重组幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白rMBP-NAP,筛选幽门螺杆菌口服疫苗抗原组分.方法:0.3 mmol/L IPTG在37℃,230 r/min条件下诱导基因工程菌E.coli TB1(pMAL-c2x-napA)3 h.4℃4 000 g离心20 min收获细胞.过柱缓冲液重悬细胞,-20℃冻存过夜,在冰水浴中超声破碎工程菌,4℃,9 000 g离心30 min,十二烷基磺酸钠-聚炳烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析工程菌中rMBP-NAP可溶性;低相对分子质量蛋白Marker做标准对照,GeneTool测定诱导蛋白相对分子质量.FPLC分子排阻层析法分离rMBP-NAP;SDS-PAGE凝胶扫描法测纯化蛋白质的纯度,Bradford法检测蛋白质含量.结果:E.coli TB1(pMAL-c2x-napA)诱导表达的rMBP-NAP主要以可溶性形式存在于超声上清中,占上清中蛋白总量的39.35%,相对分子质量约为57 000,与预期结果一致;分子大小排阻层析一步法纯化rMBP-NAP纯度可达91%,含量可达0.121 g/L.结论:FPLC分子排阻层析可从大肠工程菌超声菌液中快速纯化rMBP-NAP.