重组大鼠14-3-3γ蛋白在大肠杆菌中的融合表达与分离纯化

摘要

目的:利用分子克隆技术在原核细胞中研究14-3-3γ融合蛋白的表达及分离纯化.方法:采用RT-PCR法从大鼠心肌组织中扩增14-3-3γ cDNA编码区,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-KG中,免疫印迹法检测表达产物.结果:经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达,表达产物的蛋白量约为菌体总蛋白的27.08%,相对分子质量为56 000左右.能与抗鼠14-3-3γ多克隆抗体特异性结合.结论:表明成功构建了GST-14-3-3γ融合蛋白载体,在大肠杆菌中有高效表达,并具有良好的免疫反应性.