髓细胞条件性METTL3基因敲除小鼠的构建与鉴定

摘要

目的:构建髓细胞条件性METTL3基因敲除小鼠模型。方法:将Lyz2-cre^((+/+))雌性小鼠与METTL3^((flox/flox))雄性小鼠杂交,得到METTL3^((flox/-))Lyz2-cre^((+/-))杂合子小鼠,该杂合子小鼠自交,得到METTL3^((flox/flox))Lyz2-cre^((+/+))小鼠。提取小鼠鼠尾组织DNA,经PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳和DNA序列测定,在DNA水平判断小鼠基因型;提取小鼠骨髓细胞RNA,利用RT-PCR法检验METTL3的敲除效率;利用成像流式细胞仪在蛋白水平分析髓细胞中METTL3的敲除效率。结果与结论:在DNA、RNA和蛋白水平分别验证了髓细胞条件性METTL3基因敲除小鼠模型构建成功,该小鼠存活并且可育,为研究METTL3在髓源抑制性细胞功能中的作用提供了研究平台。