牙龈卟啉单胞菌重组牙龈蛋白酶刺激牙龈成纤维细胞内钙离子浓度变化及其机制

摘要

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌重组牙龈蛋白酶(r Rgp B)刺激蛋白酶激活受体(PAR)介导的人牙龈成纤维细胞(HGF)内钙离子浓度([Ca^(2+)]i)的动态变化及细胞内信号转导通路。方法:流式细胞术检测HGF表达的PAR类型,CCK-8法检测细胞增殖,以牙龈卟啉单胞菌r Rgp B作用于HGF,激光共聚焦显微镜观察HGF内[Ca^(2+)]i的动态变化及PAR-1拮抗剂的阻断作用;蛋白质印迹法检测HGF内c-Jun氨基末端激酶(JNK)、胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)、p65蛋白水平的变化。结果:HGF表达PAR-1和PAR-3,且r Rgp B可促进HGF生长。细胞受到r Rgp B作用后能激发瞬时增强的[Ca^(2+)]i荧光信号,并且这种作用能够被PAR-1拮抗剂完全阻断;与空白对照组比较,r Rgp B诱导细胞6、12 h后,JNK、ERK1/2、p65磷酸化蛋白表达均显著上调(均P0.05);PAR-1拮抗剂成功抑制了r Rgp B诱导的JNK、ERK1/2、p65磷酸化蛋白表达的上调。结论:r Rgp B通过PAR-1诱导HGF内[Ca^(2+)]i增加,并激活细胞内JNK、ERK1/2、核因子κB信号通路。