拟炎症高NO大鼠原代培养肝细胞的信号转导途径研究

摘要

目的:通过对信号分子NO在原代培养大鼠肝细胞所经由的信号转导途径研究,探索炎症急性期肝细胞高NO的生物学意义,及药物可能作用的新靶点.方法:采用NO供体硝普钠(SNP)模拟肝脏急性炎症期高NO环境,Griess法测定NO的特异氧化终产物NO2-/NO3-.测定肝细胞中cGMP的浓度和肝细胞培养液中GSNO的浓度,由此分别了解在原代培养大鼠肝细胞模型,NO经由cGMP通路信号转导,还是经由非cGMP通路信号转导的途径.结果:1.543 mmol/L SNP释放NO达峰值分别为,以25 mmol/L GSH为NO释放通路,30 min时为(0.63±0.06)mmol/L;以25 mmol/L L-Cys为活性巯基通路,25 min时为(0.98±0.11)mmol/L.SNP与原代培养大鼠肝细胞共孵育过程中,随着孵育时间的延长及SNP浓度的增高,细胞内cGMP含量与对照组相比有显著性差异(P<0.05);培养液中GSNO浓度也有增高.与对照组比均有显著差异(P<0.05).结论:NO供体SNP在含有巯基(GSH和Cys)的肝细胞培养液中可持续释放NO,通过cGMP依赖性通路和cGMP非依赖性通路--GSNO通路进行信号转导,影响下游生物学效应靶点.