化学诱变剂诱发基因非定标性突变的分子机理研究

摘要

应用将突变靶基因与哺乳细胞基因组 DNA相分离的实验体系 ,证明化学诱变剂 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中 (非定标性突变 ) ,并有突变谱特征和突变好发的序列特异性。它的发生在于化学诱变剂诱发的基因表达改变。应用 m RNA差异显示和反义核酸技术分离到2个基因表达序列标识 ,阻断其相关基因表达 ,可分别促进和抑制化学诱变剂诱发的非定标性突变。应用蛋白质组学技术发现有 6 0多个蛋白质斑点在 MNNG处理后发生了显著变化 ,根据肽质指纹图对其中大部分蛋白作了鉴定 ,发现了很多新的参与应答的蛋白质。用体外 DNA复制技术证明 ,其发生基础是化学诱变剂引发细胞 DNA复制保真度的下降 ,而细胞错配修复功能未发现异常 ,但 DNA聚合酶酶谱发生改变。用反义核酸技术 ,证明 POLζ、POLκ和 POLη可能参与非定标性突变形成。其发生可因细胞应激信号通路激活剂所促进 ,在化学诱变剂作用后有蛋白磷酸化谱和蛋白酪氨酸残基磷酸化谱的改变以及应激激活蛋白激酶的激活 ,提示细胞信号转导通路的激活参与了非定标性突变的发生。研究还证明调节 POLβ表达的 c AMP- PKA- CREB通路在 MNNG处理后激活 ;MN-NG还可诱发细胞表面受体的聚簇 ,但其发生并不依赖于