小鼠CCL21真核表达载体构建及趋化活性检测

摘要

目的:构建趋化因子CCL21的真核表达载体并表达蛋白,初步检测其趋化活性。方法:RT-PCR方法扩增CCL21 cDNA片段,并将扩增的片段插入pcDNA3.1真核表达载体,构建重组载体pcDNA3.1-m CCL21,将其转染到小鼠前胃癌细胞(mouse forestomach carcinoma,MFC)。利用趋化小室法,检测表达产物针对树突状细胞(DC)趋化活性。结果:基因测序结果证实克隆产物为CCL21基因scya21b型,pcDNA3.1-mCCL21载体构建成功,Western印迹法检测到CCL21蛋白表达,转基因细胞的培养上清对树突状细胞具有显著趋化活性。结论:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-m CCL21,其表达产物具有针对DC的趋化活性。