联合应用噬菌体展示技术与重组cDNA表达文库血清学分析技术筛选肺癌早期诊断相关抗原

摘要

目的:筛选有效的人肺癌早期诊断相关抗原,以提高肺癌的早期诊断水平.方法:构建人早期肺癌cDNA T7噬菌体展示文库;筛选出差异性噬菌体克隆,测序后进行生物信息学分析;最后利用重组cDNA表达文库血清学分析(SEREX)技术对8个差异性噬菌体克隆构建肺癌相关抗原微阵列,分别与肺癌患者和正常人的血清反应,评价各个抗原单独应用与联合应用诊断肺癌的价值.结果:构建的肺癌T7噬菌体展示文库的滴度为3.71×106 pfu/ml,噬菌体数为1.11×106 pfu.cDNA文库的重组率超过90％.筛选出9个差异性噬菌体克隆,测序后发现A42与A83抗原的基因序列相同.生物信息学分析发现8个抗原的基因均为已知基因,除了A64以外,其余与肿瘤均有明确的关系.8个抗原与肺癌患者血清的阳性反应率均高于与正常人血清的阳性反应率,差异均具有统计学意义(均P ＜0.05).在特异性不低于60％的情况下,各个抗原单独用于肺癌诊断时的灵敏性均低于70％.各个抗原的曲线下面积均低于0.8.而复合抗原诊断肺癌的灵敏性为90.8％,特异性为94.1％,曲线下面积高达0.969.结论:本研究成功构建了库容量大、重组率高、代表性好的人肺癌T7噬菌体展示文库,并筛选到8个肺癌相关抗原.由这8个抗原组成的复合抗原诊断肺癌的灵敏性与特异性均在90％以上,诊断价值较高.