松针的显微及分子鉴别研究

摘要

目的:利用显微和分子鉴定技术对不同植物基源的松针药材进行鉴别,为松针的鉴别提供科学依据。方法:采用基源、显微鉴定的方法研究马尾松(Pinus massoniana Lamb.)、黑松(Pinus thunbergii Parl.)和华山松(Pinus armandii Franch.)的特征;利用PCR扩增和双向测序分析植物DNA条形码ITS2和rbc L序列特征;采用分子进化遗传分析(MEGA)6.0软件进行种间、种内Kimura2-parameter(K2P)遗传距离计算,并构建邻接系统聚类树。结果:三种松针数目及长度、维管束数、气孔线的分布、树脂道数目及分布等具有明显区别。马尾松、黑松和华山松的ITS2序列长度分别为470、469和470 bp,rbc L序列长度均为553 bp;ITS2序列在马尾松、黑松和华山松的种内变异率分别为0%、0.2%和2.8%,rbc L序列在这三种松针样品的种内变异率分别为0%、2.4%和1.1%。ITS2序列在松针的种内和种间遗传距离中不存在显著的条形码间隔;而rbc L序列的种内和种间距离存在一定的条形码间隔。邻接系统树结果表明,三种松针药材聚为不同的分支,rbc L条形码序列可鉴别马尾松、黑松、华山松及其近缘的植物。结论:利用基源、显微及分子鉴定技术可准确、快速地鉴别马尾松、黑松和华山松,为松针的质量评价和分类鉴别提供了方法和依据。