念珠藻Fe-SOD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

摘要

根据低等物种Fe-SOD核酸序列设计简并引物,以念珠藻基因组为模板,扩增获得了念珠藻Fe-SOD基因.将此基因重组至原核表达载体pET22b(+),构建成工程菌pET-SOD,并转化至大肠杆菌宿主.异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得Fe-SOD蛋白分子量约为28 kD,占全菌蛋白的78%,并以包涵体形式表达.经Ni2+亲和层析柱纯化后,目的蛋白的SOD比活力达1 100 U/mg,在紫外可见光谱中表现出金属Fe的特征峰.肿瘤细胞共培养试验表明,此Fe-SOD具有一定的抗SPC-A-1肺腺癌细胞增殖的能力.