肝癌抑制基因-1转运功能区的研究

摘要

肝癌抑制基因-1(hepatocellular carcinoma suppressor 1,HCCS1)是一种潜在的肝癌抑制基因,在细胞内发挥蛋白分拣运输的作用,其抑癌作用有可能与蛋白转运的功能有一定的关系。本研究旨在寻找HCCS1序列中与转运功能相关的序列区域。首先通过亚克隆技术,构建以pEGFP-C2为载体,对不同长度HCCS1-cDNA片段进行亚克隆,将构建的亚克隆转染到HeLa细胞,通过免疫荧光显微镜观察不同长度HCCS1蛋白在细胞内的分布,及其与6-磷酸甘露糖受体(M6PR)的共定位。经过PCR及亚克隆后,目的片段成功插入载体质粒,构建了以pEGFP-C2为载体的含有4个不同长度HCCS1片段的亚克隆。分别是:pEGFP-C2-N1836,pEGFP-C2-N1572,pEGFP-C2-1707和pEGFP-C2-1506,其中pEGFP-C2-N1836和pEGFP-C2-N1572编码的HCCS1蛋白,长度不同均呈颗粒状、极性分布于核周的胞质内,且与M6PR有共定位;而pEGFP-C2-1707片段编码的HCCS1蛋白虽然也呈颗粒状分布于核周,但极性分布消失,且与M6PR共定位消失;pEGFP-C2-1506与pEGFP-C2-1707结果相似。结果显示了HCCS1-cDNA的5’端的129 bp序列为与HCCS1的极性及M6PR共定位相关的区域。