一、肝癌抑制基因-1转运功能区的研究;二、构建cea-sVISA-dkk1质粒在结肠癌个性化治疗上的探索

摘要

第一部分、肝癌抑制基因-1转运功能区的研究
　　 肝癌作为恶性程度最高的癌症之一,已严重威胁到了人类的生命健康,但是到目前为止都还没有很理想的治疗方法。
　　 肿瘤的靶向-基因-病毒治疗策略是在基因治疗和病毒治疗的基础上发展起来的一种新的肿瘤治疗方案。它将溶瘤病毒在肿瘤细胞内特异性增殖并裂解细胞的能力和治疗肿瘤的对肿瘤细胞的杀伤或抑制作用有机结合起来,达到了溶瘤病毒和治疗基因共同杀伤肿瘤的效果。基于此,我们探讨了抑癌基因和安全性载体等工作。
　　 肝癌抑制基因-1(haepatocellular carcinoma suppressor1,HCCS1)是一种潜在的肝癌抑制基因,其cDNA全长约2.1kb,共有18个外显子。HCCS1在肝癌组织中存在高频突变,且表达水平明显低于癌旁组织,其在体内、体外均可抑制癌细胞的生长。最近研究显示了其在细胞内蛋白分拣运输中的重要作用,与此同时,确立了与HCCS1基因蛋白转运相关的最小功能序列区已经确定为451bp,但是其近N端序列区的功能,迄今未见报道。因此本实验构建了以pEGFP-C2为载体的一系列含有不同长度HCCS1片段的亚克隆,通过免疫荧光共聚焦观察其与M6PR的共定位情况,根据结果分析,初步确定了HCCS1与转运M6PR相关的功能序列,从而为进一步研究HCCS1的功能奠定了基础,同时具有一定的临床应用前景。
　　 第二部分、构建cea-sVISA-dkk1质粒在结肠癌个性化治疗上的探索
　　 肿瘤的发生和发展是一个多步骤的过程。遗传基因的改变,特别是抑癌基因发生突变和原癌基因被激活,是导致癌症发生的主要原因。由于它们的改变,使得与细胞生长和分化相关的基因的表达和功能发生改变,进而使正常细胞逐渐转化为肿瘤细胞
　　 CCKAR-VISA是一种强效的胰腺癌特异性表达载体,全身用药CCKAR-VISA启动BikDD,一种有效的促凋亡的基因,在DNA水平脂质体复合物强烈的抑制了胰腺癌的生长和转移,并且延长多发性正常老鼠模型的生存时间。这些发现形成了一种有可能清除胰腺癌的安全并有效的治疗策略,并且最终要研究出一种有用的模型可以进行非侵袭性的时空监控。最新研究出的VISA体系是一种通用的工具,它可以促进其他组织或者肿瘤特异性启动子的表达,可以成为其他疾病有希望的治疗方法。
　　 CEA作为肿瘤相关抗原之一,在很多肿瘤中均有表达,表达率在结直肠癌为60％～80％,胃癌49％～60％,肺癌52％～77％,乳腺癌30％～50％,胰腺癌64％,甲状腺癌60％。Dickkopf1(DKK1)是Wnt信号通路中Wnt因子的抑制因子,已有研究证明Dkk1在结肠癌细胞表达缺失,起抑癌基因的作用。外源Dkk1可反馈抑制突变型p53的生成,下调Bcl-2,增加Bax因子表达而抑制结肠癌的增殖。因此用CEA作为启动子,调控肿瘤杀伤基因DKK1在癌细胞中的表达,从而达到杀伤肿瘤细胞的目的,这一方法目前已经开始应用于临床研究中。