水稻端粒酶RNA候选序列的克隆及特征解析

摘要

端粒酶是由端粒酶反转录酶和端粒酶RNA构成,端粒酶RNA中含有端粒合成所需的模板序列。现仅获得了拟南芥的端粒酶RNA序列。为了建立快速有效的富集植物端粒酶的方法并克隆水稻的端粒酶RNA序列,研究中使用不同浓度的PEG6000选择性的沉淀端粒酶萃取液中的杂蛋白。结果表明当PEG6000浓度为4%时,端粒酶活力最高,并可以有效降低核糖体28SrRNA和18SrRNA的干扰。从端粒酶蛋白液中提取RNA,并在其3′端连接接头,在模板区设计上游引物,PCR扩增获得一条292bp的未知片段,其中含有端粒模板序列5′-AAACCCTAA-3′。将该片段及拟南芥端粒酶RNA的转录调控区进行序列比对分析发现,两者具有类似的转录调控元件。因此,初步判定292bp的目的片段为水稻端粒酶RNA的模板下游序列。