烟草尼古丁去甲基酶基因CYP82E4启动子结合蛋白的鉴定与分析

摘要

以尼古丁去甲基酶编码基因（CYP82E4）上游的启动子功能元件作为诱饵,使用酵母单杂交方法从喷施乙烯利叶片的c DNA融合表达文库中钓取与之相互作用的结合蛋白.研究结果表明,诱饵载体p HIS2/p E4和c DNA融合表达载体p GADT7-Rec2共转化到酵母细胞中的效率为1×106.对文库的筛选结果表明,本研究共获得39个阳性克隆,且阳性克隆的插入片段在850～2 500 bp之间.将获得的39个阳性克隆进行测序,其中发现1个可能参与基因（CYP82E4）表达调控的锌指蛋白转录因子.下一步将对其功能进行分析,为通过分子育种手段培养低含量去甲基尼古丁的烟草提供实验基础.