荷载SPAG9基因shRNA的溶瘤腺病毒对前列腺癌细胞增殖及侵袭作用的影响

摘要

目的 研究荷载精子相关抗原9(sperm associated antigen 9,SPAG9)基因shRNA的溶瘤腺病毒对人前列腺癌细胞株PC-3和DU145增殖及侵袭作用的影响,并初步探讨其作用机制.方法 采用同源重组法构建溶瘤腺病毒ZD55-SPAG9,采用PCR法进行鉴定.荧光显微镜观察病毒转染情况.CCK-8法检测溶瘤腺病毒对细胞增殖的作用.结晶紫法观察溶瘤腺病毒的细胞毒性.Transwell检测溶瘤腺病毒对细胞侵袭作用的影响.Western blot检测溶瘤腺病毒处理后PC-3和DU145细胞中SPAG9、E-cadherin、Vimentin和MMP-2蛋白的表达.结果 溶瘤腺病毒ZD55-SPAG9包装成功,在PC-3和DU145细胞转染情况良好.ZD55-SPAG9对前列腺癌细胞增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性.随着病毒滴度的增加,ZD55-SPAG9对PC-3和DU145细胞的毒性逐渐增加.与PBS组和ZD55-EGFP组比较,ZD55-SPAG9组侵袭的PC-3和DU145细胞数目明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).与PBS组和ZD55-EGFP组比较,ZD55-SPAG9组PC-3和DU145细胞中SPAG9、MMP-2、Vimentin蛋白表达量显著降低,E-cadherin蛋白表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ZD55-SPAG9能够显著抑制人前列腺癌PC-3和DU145细胞的增殖和侵袭能力,其机制可能与上皮细胞间质化有关.