溶瘤腺病毒

摘要： 目的:探究特异性溶瘤腺病毒(Ad-Mock、Ad-T)对肺癌细胞上PD-L1表达的调控作用及对细胞凋亡的影响。方法:采用荧光定量PCR法及Western blot检测溶瘤腺病毒在24 h和48 h对NCI-H446、NCI-H226、A549细胞表达PD-L1的影响;通过结晶紫染色、WST-1、Hoechst与JC-1法检测溶瘤腺病毒对肺癌细胞的凋亡抑制作用。结果:特异性溶瘤腺病毒在24 h和48 h均可抑制肺癌细胞表达PD-L1,抑制情况为Ad-T>Ad-Mock,且PD-L1表达量与作用时间呈负相关;溶瘤腺病毒对3种肺癌细胞均具有抑制作用并通过降低线粒体膜电位的方式诱导细胞凋亡,且抑制效果为Ad-T>Ad-Mock,抑制作用与时间呈正相关。结论:特异性溶瘤腺病毒可以抑制肺癌细胞PD-L1的表达并可诱导肺癌细胞的凋亡,对肺癌细胞具有抑制作用。

摘要： 溶瘤腺病毒(0A),也称为条件增殖型腺病毒,是经基因改造,只在肿瘤细胞中特异增殖的新一代腺病毒载体,此载体对正常细胞无影响。其能感染特定类型肿瘤细胞,通过复制、增殖、裂解并杀伤肿瘤细胞,同时利用其高效的转染效率携带治疗基因,以此提高抗肿瘤效果,利用肿瘤特异性启动子是构建OA的主要方法。本文概述了肿瘤特异性启动子在OA治疗泌尿系肿瘤中的研究进展。

摘要： 溶瘤腺病毒(OA),也称为条件增殖型腺病毒,是经基因改造,只在肿瘤细胞中特异增殖的新一代腺病毒载体,此载体对正常细胞无影响.其能感染特定类型肿瘤细胞,通过复制、增殖、裂解并杀伤肿瘤细胞,同时利用其高效的转染效率携带治疗基因,以此提高抗肿瘤效果,利用肿瘤特异性启动子是构建OA的主要方法 .本文概述了肿瘤特异性启动子在OA治疗泌尿系肿瘤中的研究进展.

摘要： 目的分析11株来自中国尚未明确分型的HAdV病毒株完整基因组的基因特征并分型。方法从GenBank数据库中下载到67条已明确基因型的HAdV基因组序列和7条HAdV参照基因组序列,将这74条参照序列与11株未明确分型的HAdV病毒株基因组序列进行基因结构、基因同源性以及系统进化等分析,从而确定其分型。结果从系统进化分析结果预测出6株HAdV可能的分型,再由多序列比对分析进行验证。其中两株HAdV通过多序列比对结果发现与HAdV-B参照基因组序列之间的同源性为97.8%,属于B型HAdV;两株HAdV与HAdV-D参照基因组序列之间的同源性为92.8%,属于D型HAdV;还有两株HAdV的多序列比对结果与系统进化分析预测结果不一致,无法推断其分型。剩余5株未能预测的HAdV通过与7条HAdV参照序列进行多序列比对分析,发现与B型HAdV基因组序列的同源性达到了97.9%,推测这5株HAdV基因组可能属于B型HAdV。结论从基因角度来对11株未知的HAdV基因组进行分型,预测有7株可能属于B型HAdV,有两株可能属于D型HAdV,还有两株无法判断其分型。其中7株B型HAdV可能适合作为溶瘤腺病毒进行骨肉瘤的治疗。

摘要： 目的 观察溶瘤腺病毒差异显示编码3(DD3)-ZD55-精子相关抗原9(SPAG9)在体外对激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞的治疗效果,并探讨作用机制.方法 将LNCaP细胞分为4组进行干预,分别为磷酸盐缓液组(PBS)、病毒对照组[ZD55-增强型绿色荧光蛋白(EGFP),10 MOI]、病毒治疗组(ZD55-SPAG9,10 MOI)、DD3启动子调控组(DD3-ZD55-SPAG9,10 MOI).细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率;Transwell检测细胞迁移和侵袭能;蛋白质印迹法(Western blot)检测SPAG9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和腺病毒早期区1A基因(E1A)的表达.多组之间采用方差分析,进一步组间比较采用SNK法.结果 CCK-8结果,DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和ZD55-EGFP组LNCaP细胞存活率均显著低于PBS组[(73.80 1.43)％、(73.66 2.19)％、(81.79 2.59)％比 100％,F = 1038.210,P＜0.01],ZD55-SPAG9组与DD3-ZD55-SPAG9组细胞存活率降低更为显著,但两者之间存活率差异无统计学意义(P＞0.05).Transwell 迁移结果,DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和 ZD55-EGFP 组小室底膜细胞数明显低于 PBS 组[(52.57±5.57)、(48.67±4.04)、(69.67±6.02)比(109.06±9.54),F =384.466,P＜0.05],ZD55-SPAG9组与DD3-ZD55-SPAG9组细胞迁移能力降低更为显著,且两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).侵袭实验结果,DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和ZD55-EG-FP组穿透Matrigel胶,进入小室下层的细胞数目明显少于PBS组[(58.33±3.79)、(55.36±7.51)、(78.06±4.36)比(115.67±11.59),F= 305.885,P＜0.01],提示细胞侵袭能力显著降低,ZD55-SPAG9组与DD3-ZD55-SPAG9组细胞侵袭能力降低更为显著.Western blot结果显示,与PBS组比较,DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和 ZD55-EGFP 组内 SPAG9蛋白表达下调[(0.32±0.07)、(0.47±0.09)、(0.66±0.05)比 1,F = 594.522,P＜0.01],E-cadherin 表达上调[(4.80±0.34)、(3.80±0.35)、(2.81±0.52)比 1,F = 482.275,P＜0.01],Vimentin 表达下调[(0.33±0.04)、(0.46±0.06)、(0.53±0.05)比 1,F = 903.749,P＜0.01],MMP-2表达下调[(0.30±0.03)、(0.44±0.05)、(0.60±0.05)比 1,F=1 540.940,P＜0.01],上述变化在 ZD55-SPAG9组与 DD3-ZD55-SPAG9组内更为显著.WPMY-1细胞内E1A在DD3-ZD55-SPAG9组内的表达明显低于ZD55-SPAG9和ZD55-EGFP组.结论 溶瘤腺病毒DD3-ZD55-SPAG9在体外可以有效降低LNCaP细胞的存活率,并抑制迁移和侵袭,并对正常细胞具有更高的安全性.

摘要： 目的 观察差异显示编码3(DD3)启动子调控的携带精子相关抗原9(SPAG9)基因短发夹RNA(shRNA)的新型溶瘤腺病毒(DD3-ZD55-SPAG9)对激素依赖性前列腺癌LNcap细胞系裸鼠移植瘤的治疗作用.方法 构建裸鼠前列腺癌LNCaP细胞皮下移植瘤模型,当肿瘤体积为100 mm3随机分成3组,空白对照组(PBS组)、对照病毒组(ZD55-SPAG9组)、病毒组(DD3-ZD55-SPAG9组).测量肿瘤体积,绘制肿瘤时间-体积生长曲线.苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞的生长.原位缺口末端标记法(TUNEL)检测肿瘤组织内细胞凋亡.免疫组织化学检测肿瘤组织中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-8蛋白的表达.采用方差分析(One way-ANOVA),组间比较采用SNK法.结果 成功构建裸鼠LNcap细胞移植瘤模型.DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组和PBS 组移植瘤终体积分别为(1 104.04±110.39)、(1 003.20±150.89)和(2 321.36±173.87)mm3.DD3-ZD55-SPAG9组和ZD55-SPAG9组肿瘤体积均小于PBS组,差异有统计学意义(F=203.997,P＜0.05),但DD3-ZD55-SPAG9组、ZD55-SPAG9组之间差异无统计学意义(P＞0.05).HE染色结果显示,DD3-ZD55-SPAG9组和ZD55-SPAG9组的肿瘤组织中均可见较多的死细胞,细胞裂解成碎片,细胞核固缩碎裂,其正常的组织结构消失,两者差异无统计学意义(P＞0.05).TUNEL结果显示,DD3-ZD55-SPAG9组和ZD55-SPAG9组的肿瘤组织切片荧光下均可见较多红色信号,提示细胞凋亡,凋亡信号强度明显高于PBS组,差异有统计学意义(F=80.932,P＜0.05),两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组织化学法检测肿瘤组织中Caspase-3和Caspase-8蛋白表达的结果显示,DD3-ZD55-SPAG9组和ZD55-SPAG9组与PBS组比较,Caspase-3和Caspase-8蛋白表达量增多,差异有统计学意义(F=73.848、61.514,P＜0.05),两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DD3-ZD55-SPAG9可以有效抑制前列腺癌LNCaP细胞皮下移植瘤的生长,与对照病毒ZD55-SPAG9比较差异无统计学意义,其机制包括抑制肿瘤细胞生长、诱导凋亡.

摘要： 溶瘤腺病毒是一种经过人工改造的,可以特异性杀伤肿瘤细胞的一类腺病毒.常用的腺病毒为致病力弱的人血清2型或5型腺病毒.该病毒对正常机体的细胞无明显不良反应,但是可以特异性地在肿瘤细胞中大量增殖、裂解肿瘤细胞和破坏肿瘤微环境.在溶瘤腺病毒的作用下被感染的肿瘤细胞释放出大量的肿瘤特异性抗原,进而激发全身性的抗肿瘤免疫反应,最终达到治疗肿瘤的目的.溶瘤腺病毒治疗肿瘤不良反应小、精度高、抗干扰能力强,具有广阔的运用前景.

摘要： 为了进一步增强膀胱癌组织特异性溶瘤腺病毒基因治疗的有效性,可以将肿瘤微环境作为靶点进行研究,有研究表明,细胞内外微环境的改变可以影响腺病毒载体的复制和凋亡相关蛋白的表达,同时在腺病毒侵染细胞的过程中,细胞会应激产生自由基活性氧和活性氮,由于自由基可作为一种第二信使分子参与细胞信号通路调控基因的表达,能改变细胞内氧化应激状态,从而调节细胞生长、增殖及凋亡过程,所以本研究观察在重组溶瘤腺病毒Ad/UPII/E1A转染膀胱肿瘤细胞的过程中,施加外源的自由基供体,探讨自由基对膀胱癌特异性溶瘤腺病毒基因治疗肿瘤中的作用及其可能机理.

摘要： 肿瘤基因治疗的成功不仅在于其有效性,特异性也是重要评测指标之一.本研究以RAPAd.I腺病毒载体为基础,以特异性抑癌基因(Apoptin)为效应物质,以肿瘤特异性启动子(hTERTp)驱动腺病毒复制必需基因Ela,构建了具有肿瘤特异性杀伤和肿瘤特异性复制功能的双特异性抗肿瘤重组腺病毒,并对其进行了体内外抑癌实验研究.rn 本研究基于肿瘤特异性启动子hTERTp和特异性抑瘤基因Apoptin，利用RAPAd.I腺病毒载体系统构建的具有肿瘤特异性杀伤和肿瘤特异性复制能力的双特异抗肿瘤治疗性重组腺病毒Ad-VT，能够有效抑制多种肿瘤细胞的生长，并能显著延长模型动物平均生存期，为研制安全、特异、高效的抗肿瘤治疗性制剂奠定了基础，并为揭示Apoptin的抑瘤和免疫调控机理提供了参考数据。

摘要： 本发明公开了重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用，所述重组溶瘤腺病毒载体的构建方法包括以下步骤：在腺病毒质粒中引入编码RGD肽的基因，构成靶向性骨架质粒；将shRNA抗肿瘤干细胞标志分子ALDH1A1的基因序列以及促凋亡基因PUMA的基因序列连接至第一穿梭质粒，构成第二穿梭质粒；将人端粒逆转录酶启动子连接至第二穿梭质粒，构成第三穿梭质粒；将第三穿梭质粒与靶向性骨架质粒在大肠杆菌中重组为重组溶瘤腺病毒载体；该方法构建出的重组溶瘤腺病毒载体线性化后转染至病毒包装细胞中进行包装、扩增、纯化后获得重组溶瘤腺病毒，从而能够有效的识别并杀死多种恶性肿瘤的肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞。

摘要： 本发明涉及具有腺病毒蛋白的免疫显性T细胞表位的功能性缺失的溶瘤腺病毒，以及使用该溶瘤腺病毒来治疗诸如癌症等疾病的方法。该溶瘤腺病毒还可包括各自编码肿瘤抗原或表位的一种或多种异源核酸序列。该溶瘤腺病毒还可包括用于赋予选择性和抗肿瘤效力的DNA序列的其它突变和插入。本发明应用于癌症治疗领域。

摘要： 本发明涉及生物技术和基因治疗领域，具体而言，涉及一种溶瘤腺病毒，用于制备该腺病毒的载体及其应用。所述溶瘤腺病毒可以联合表达decorin和GM‑CSF蛋白，将其应用于结肠癌的治疗，可为结肠癌的治疗提供一种有效的免疫基因治疗方案。

摘要： 本发明公开了一种转录调控肿瘤靶向复制溶瘤腺病毒载体、携带治疗基因的腺病毒及其制备方法和应用。所述腺病毒载体基因序列如SEQ ID NO.1所示；所述腺病毒的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

摘要： 本发明公开了重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用，所述重组溶瘤腺病毒载体的构建方法包括以下步骤：在腺病毒质粒中引入编码RGD肽的基因，构成靶向性骨架质粒；将shRNA抗肿瘤干细胞标志分子ALDH1A1的基因序列以及促凋亡基因PUMA的基因序列连接至第一穿梭质粒，构成第二穿梭质粒；将人端粒逆转录酶启动子连接至第二穿梭质粒，构成第三穿梭质粒；将第三穿梭质粒与靶向性骨架质粒在大肠杆菌中重组为重组溶瘤腺病毒载体；该方法构建出的重组溶瘤腺病毒载体线性化后转染至病毒包装细胞中进行包装、扩增、纯化后获得重组溶瘤腺病毒，从而能够有效的识别并杀死多种恶性肿瘤的肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞。

摘要： 本发明涉及具有腺病毒蛋白的免疫显性T细胞表位的功能性缺失的溶瘤腺病毒，以及使用该溶瘤腺病毒来治疗诸如癌症等疾病的方法。该溶瘤腺病毒还可包括各自编码肿瘤抗原或表位的一种或多种异源核酸序列。该溶瘤腺病毒还可包括用于赋予选择性和抗肿瘤效力的DNA序列的其它突变和插入。本发明应用于癌症治疗领域。

摘要： 本发明涉及生物技术和基因治疗领域，具体而言，涉及一种溶瘤腺病毒，用于制备该腺病毒的载体及其应用。所述溶瘤腺病毒可以联合表达decorin和GM‑CSF蛋白，将其应用于结肠癌的治疗，可为结肠癌的治疗提供一种有效的免疫基因治疗方案。

摘要： 本发明公开了一种转录调控肿瘤靶向复制溶瘤腺病毒载体、携带治疗基因的腺病毒及其制备方法和应用。所述腺病毒载体基因序列如SEQ ID NO.1所示；所述腺病毒的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

摘要： 本发明涉及基因工程学和病毒学，尤其涉及一种含人类B亚群11型腺病毒纤毛蛋白基因的增殖型重组溶瘤腺病毒、其构建方法及其用途。该腺病毒可以是11型腺病毒，也可以是用11型腺病毒纤毛蛋白的编码序列取代非11型腺病毒的纤毛蛋白编码序列而构成的杂合腺病毒。该腺病毒通过对其增殖必须基因进行的有效控制或突变而具有选择性增殖能力。作为具有更广的感染谱和改良感染能力的条件增殖型的重组病毒，本发明的重组溶瘤腺病毒可以用于基因治疗尤其是肿瘤的基因治疗。

摘要： 本发明提供了一种新型溶瘤腺病毒载体、由其包装的病毒及其应用。本发明揭示了一种新型腺病毒载体，并在该新型载体的基础上引入了一个或多个外源增强抑癌效果的基因(如溶瘤基因)，实现高效表达。同时，该复合型溶瘤腺病毒可以显著地抑制肿瘤，杀伤能力强。