人宫颈癌干细胞分离、鉴定及其特性

摘要

目的探讨人宫颈癌干细胞(CCSCs)的分离、培养、鉴定方法以及CD44、CD24对其生物学特性的作用。方法选择2017年1月—2018年2月武警四川省总队医院妇科收治的32例宫颈癌患者为研究对象,收集其宫颈癌组织作为实验组,另选32例子宫全切术患者,留取其正常宫颈黏膜组织作为空白组。蛋白酶消化联合体外细胞培养,在流式细胞术下分选细胞,分为CD44^(+)CD24^(+)组、CD44^(-)CD24^(-)组与对照组。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法和平板集落形成实验检测细胞增殖能力。取4~6周龄,雄性Balb/c裸小鼠24只,将CD44^(+)CD24^(+)、CD44^(-)CD24^(-)细胞在裸小鼠腋下进行体内移植瘤实验观察细胞成瘤率。通过端粒重复序列扩增法(TRAP)联合电泳法测定端粒酶活性。结果实验组中的CD44^(+)、CD24^(+)阳性细胞百分比均高于空白组(P<0.05)。CD44^(+)CD24^(+)组细胞的体外增殖活性高于对照组和CD44^(-)CD24^(-)组细胞(P<0.05)。CD44^(+)CD24^(+)组细胞端粒酶相对表达强度和细胞集落形成率高于对照组,CD44^(-)CD24^(-)组细胞端粒酶相对表达强度和细胞集落形成率低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CD44^(+)CD24^(+)组体内成瘤时间早于对照组,且成瘤率更高(P<0.05)。结论CD44、CD24是分选人CCSCs可行的表面标记分子,获取的CD44^(+)CD24^(+)细胞可显现出肿瘤干细胞生物学特性。