人乳腺肿瘤干细胞的分离培养鉴定及低氧对乳腺肿瘤干细胞特性影响的研究

摘要

乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤,属高发病、高死亡率疾病。肿瘤术后出现较高的复发率和转移率,同时伴有对放化疗的抗药性是其高死亡率的原因之一。近年来肿瘤干细胞理论的提出突破了以往对肿瘤发生发展的认识,认为肿瘤的发生以及对放化疗的抗药性源于肿瘤组织中的肿瘤干细胞。这一肿瘤发生的模型很好的解释了肿瘤治疗失败的原因,也从细胞学的角度提出了肿瘤研究和治疗的靶点,为临床根治肿瘤提供了理论依据。
　　为此本研究拟从原代培养的肿瘤细胞中获得能持续传代的肿瘤干细胞克隆,体外培养鉴定其自我更新能力,明确其表面标志物。观察该细胞对低氧微环境的敏感性,并对乳腺肿瘤干细胞的低氧微环境进行初步的探索。希望为临床乳腺肿瘤的治疗提供实验依据,为乳腺肿瘤的诊断和治疗提供新的思路。
　　第一章人乳腺肿瘤干细胞的分离培养及鉴定
　　目的：体外分离、培养乳腺肿瘤干细胞,并鉴定其生物学特性。方法：收集临床术后乳腺癌患者的肿瘤组织,经机械剪切联合酶消化法获得肿瘤细胞并培养,流式细胞仪鉴定细胞表面抗原,MTT比色法检测细胞生长曲线,实时定量PCR(qPCR)鉴定细胞Sox2、Nanog等基因表达,免疫荧光检测细胞特异性蛋白Bcl-2、孕激素受体(PR)、VEGF、KI-67、E-cadherin的表达。结果：所获得的细胞呈克隆球样形态生长,鉴定结果发现其具有CD44+/CD24-表型,该细胞高表达Sox2、Nanog基因,且Bcl-2、PR、VEGF、KI-67、E-cadherin蛋白均阳性表达;结论：人乳腺肿瘤组织中存在具有自我更新和增殖能力、表达CD44+/CD24-的乳腺肿瘤干细胞,并能在体外长期培养。
　　第二章低氧与常氧培养条件下肿瘤干细胞特性影响比较实验
　　目的：对第一部分实验鉴定获得的乳腺肿瘤干细胞在低氧条件环境培养及正常条件环境培养观察两种条件下乳腺肿瘤干细胞特性表达差异研究。方法：在不同的培养箱条件下培养细胞,流式细胞术鉴定不同条件下乳腺肿瘤干细胞表面抗原表达,MTT比色法检测不同条件下细胞生长曲线,实时定量PCR(qPCR)鉴定不同条件下细胞Sox2、Nanog、HIF等基因表达。结果：所培养的乳腺肿瘤干细胞在不同条件培养下细胞的表达差异明显,低氧条件下培养的乳腺肿瘤干细胞在细胞培养及基因表达上明显高于正常条件下乳腺肿瘤干细胞。结论：低氧环境条件可以促进乳腺肿瘤干细胞增殖。

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前 言

第一章 人乳腺肿瘤干细胞分离培养及鉴定

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

第二章 低氧与常氧培养条件下肿瘤干细胞特性影响比较实验

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

综 述

致谢

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