长链非编码RNA Linc00658在结直肠癌中的表达及其与西妥昔单抗抵抗的关系

摘要

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)Linc00658在结直肠癌(CRC)中的表达及其与西妥昔单抗抵抗的关系。方法:采用生物信息学方法预测与miR-19a-3p及PTEN表达密切相关的LncRNA,分别用西妥昔单抗和DMSO诱导处理人CRC细胞CaCo2作为抵抗组和对照组,并利用细胞转染过表达抵抗组细胞的Linc00658作为过表达组,分别转染miR-19a-3p mimic及NC于CaCo2细胞中,作为mimic组及NC组。qRT-PCR检测Linc00658、miR-19a-3p及PTEN mRNA在对照组、抵抗组和过表达组细胞中的表达水平,Western blot检测PTEN及其下游基因磷酸化AKT(p-AKT)及磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达,CCK-8实验检测各组细胞西妥昔单抗的半数抑制浓度(IC50),荧光素酶报告基因实验验证Linc00658与miR-19a-3p的结合及其对miR-19a-3p与PTEN结合作用的影响。结果:相比对照组,抵抗组细胞Linc00658、PTEN mRNA及蛋白表达显著降低,miR-19a-3p、p-AKT及p-mTOR表达显著升高,西妥昔单抗IC50显著增高(均P<0.01);相比抵抗组,过表达组细胞Linc00658、PTEN mRNA及蛋白表达显著升高,miR-19a-3p、p-AKT及p-mTOR表达显著降低,西妥昔单抗IC50显著降低(P<0.05);相比NC组,mimic组西妥昔单抗IC50显著升高(P<0.01);miR-19a-3p mimic可显著抑制pGL3-basic-Linc00658荧光素酶活性,提示miR-19a-3p与Linc00658存在结合作用,过表达Linc00658可使miR-19a-3p mimic对pGL3-basic-PTEN的荧光抑制作用恢复。结论:Linc00658通过吸附miR-19a-3p促进PTEN的重新表达及CRC细胞对西妥昔单抗的敏感性。