罗红霉素通过上调P27^(kip-1)蛋白表达诱导离体哮喘大鼠气道平滑肌细胞凋亡

摘要

目的:观察罗红霉素(RXM)对离体哮喘大鼠气道平滑肌细胞(AMSCs)P27kip-1(以下简称P27)蛋白表达的影响及其凋亡诱导作用。方法:体外培养哮喘大鼠ASMCs,以未加RXM的ASMCs为对照组(R0组),分别以不同终浓度(10、25、50和100μg/mL)RXM处理的ASMCs为实验组(即R10组、R25组、R50组、R100组)。药物干预48 h后,检测细胞增殖和凋亡情况;RT-PCR及Western Blot法分别测定P27 mRNA及P27蛋白的表达量;Western Blot法测定活化的Caspase-3和Caspase-9的表达量。结果:RXM作用后,细胞存活率降低,而凋亡细胞比例增加,且呈量效关系。各实验组(R10组、R25组、R50组、R100组)凋亡细胞比例分别为(5.8±2.2)%、(6.3±1.1)%、(14.8±8.0)%和(39.4±7.9)%,均高于对照组的(3.3±1.2)%;P27 mRNA表达量(分别为0.31±0.05、0.35±0.07、0.38±0.06、0.47±0.05)和P27蛋白表达量(分别为0.82±0.29、0.97±0.33、1.02±0.37、1.44±0.18)均高于对照组(0.27±0.05和0.37±0.42);另外,实验组活化的Caspase-3和Caspase-9蛋白含量也较对照组增高。P27 mRNA和P27蛋白表达量与AMSCs增殖呈负相关(分别为rs=-0.864,P<0.01;rs=-0.639,P<0.05),而与AMSCs凋亡呈正相关(分别为rs=0.684,P<0.01;rs=0.622,P<0.05)。结论:RXM上调AMSCs中P27蛋白的表达量,从而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。