单链扩增复性法定向克隆蛇毒C型凝集素类蛋白基因

摘要

为克隆尖吻蝮蛇C型凝集素类蛋白基因至表达载体pBV220,在该载体的多克隆位点上选择适当的酶切位点,设计PCR引物:在目的基因上、下游引物的5′-端分别加上对应于载体的粘性末端序列,建立两个单独反应体系,每个反应体系中只加入一种引物,用Pfu DNA聚合酶催化模板DNA单链扩增;将所得的两种单链产物在适当条件下进行复性后直接与经过酶切的载体DNA连接,并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,获得足够数量的转化子.经PCR鉴定单菌落中有目标DNA片段插入,测序表明克隆连接正确.该方法以其简捷性和有效性,为基因的定向克隆提供了一个新的选择.