高产蛋白酶菌株的筛选、鉴定及其在方斑东风螺养殖中的应用

摘要

方斑东风螺是我国及东南亚地区重要的海水养殖品种,由于养殖底质污染,导致方斑东风螺病害频发。文章从健康方斑东风螺养殖池底沙中筛选蛋白酶高产菌株,基于形态、生理生化和分子特征对高产蛋白酶菌株进行鉴定,通过菌株溶血性检测和药敏试验初步评价其安全性,在单因素试验的基础上通过正交试验对其发酵培养基碳源、氮源及金属盐进行优化,并在室内养殖条件下考察了其对方斑东风螺养殖水体(氨氮、亚硝酸盐氮、化学需氧量)、底沙(总氮、有机碳)以及方斑东风螺生长(存活率、特定生长率)的影响。结果表明:从健康方斑东风螺养殖池底沙分离得到一株高产蛋白酶芽孢菌,其蛋白酶活性为324.0U·mL^(-1),命名为YZS02,经鉴定菌株YZS02为越南蔷薇菌(Rossellomorea vietnamensis),该菌株没有溶血活性,对24种抗生素敏感,其最优发酵培养基为酵母粉15g·L^(-1)、可溶性淀粉20g·L^(-1)、MgCl28g·L^(-1)、NaCl 30g·L^(-1),用此优化培养基在30℃,200r·min-1条件下摇瓶发酵24h,菌体密度可达到7.19×10^(9)个·毫升^(-1),该密度是优化前的2.89倍,同时优化后蛋白酶活性可达753.3U·mL^(-1),为原来的2.3倍。YZS02能够有效降低方斑东风螺养殖水体氨氮和化学需氧量水平,对底沙中的总氮也有很好的去除效果,试验结束时对照组水体氨氮浓度为2.33mg·L^(-1)、化学需氧量为278.37mg·L^(-1)、底沙总氮含量为538.31μg·g-1,而试验组水体氨氮浓度为0.78 mg·L^(-1)、化学需氧量为128.47mg·L^(-1)、底沙总氮含量为128.71μg·g-1。YZS02还能有效提高方斑东风螺的存活率及特定生长率。