阿霉素诱导人食管鳞癌细胞凋亡的实验研究

摘要

目的观察阿霉素(Adriamycin,ADM)对人食管鳞癌细胞的生长和凋亡的影响。方法将对数期4株人食管鳞癌细胞KYSE450、KYSE180、KYSE510和EC9706接种于96孔板,24 h后,不同浓度的ADM处理48 h。采用CCK-8方法检测ADM对各食管鳞癌细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度IC50,筛选较为敏感细胞株作为进一步研究材料。利用显微镜观察细胞形态变化,并通过4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核的变化;流式细胞术检测ADM处理后细胞线粒体膜电位和细胞周期的变化以及细胞凋亡情况,并利用免疫印迹法(Western Blot)检测凋亡相关蛋白Bax的变化、caspase-3的激活及PARP的剪切。结果ADM处理48 h后,食管癌细胞的增殖受到显著抑制。ADM对KYSE450,KYSE180,KYSE510和EC9706的半数抑制浓度(IC50)分别为97.46,111.21,168.63和368.53 ng/mL。其中,KYSE450最为敏感。ADM处理后,细胞逐渐皱缩,变圆。DAPI染色呈现凋亡细胞核形态,并呈剂量依赖性。ADM处理后,KYSE450和KYSE180细胞线粒体膜电位虽有增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。细胞周期结果表明,ADM可诱导KYSE180和KYSE450细胞S期阻滞。Annexin V-FITC/PI双染结果表明,ADM呈剂量依赖性地诱导KYSE450细胞凋亡,并激活caspase-3,促进PARP剪切,而Bax的水平呈现先升高后降低的趋势。结论ADM可抑制食管鳞癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。