广范围高效的植物乙型肝炎病毒表面抗原表达载体构建及鉴定

摘要

目的构建含乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的植物双元表达载体。方法采用高保真PCR方法从T-adr质粒扩出HBsAg基因,定向克隆到中间载体pUC18-DHA,经测序证实核酸序列正确后,再亚克隆到植物双元表达载体pG reen0029-GFP上,采用电击法将含HBsAg的植物表达载体转入根癌农杆菌中,并进行酶切证实。结果扩增的HBsAg片断亚克隆到中间载体,得到pUC18-HBsAg-DHA,测序证实HBsAg核酸序列正确,再与根癌农杆菌双元载体pG reen0029-GFP连接,获得含HBsAg基因的植物双元表达载体pG reen0029-HBsAg-DHA,转入根癌农杆菌,酶切证实正确。结论采用正确技术路线,构建了含HBsAg基因的植物表达载体,为下一步的转基因植物表达研究奠定了基础。