小鼠端粒酶蛋白亚单位重组腺病毒载体的构建及鉴定

摘要

[目的]构建小鼠端粒酶蛋白亚单位(mouse telomerase reverse transcriptase,mTERT)基因重组腺病毒载体,为下一步研究其体外表达和动物实验研究提供基础.[方法]从肝癌细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增mTERT的基因编码区序列,将序列定向克隆至真核表达载体pAC,将此表达质粒与腺病毒重组质粒pJM17共同转染293细胞,经同源重组产生重组腺病毒载体Ad-mTERT,纯化后的重组腺病毒载体Ad-mTERT在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测定病毒滴度.[结果]PCR及酶切证实:mTERT DNA正确克隆到穿梭质粒pAC中,带mTERT DNA的表达盒成功重组到腺病毒载体基因组E1A缺失区,并在293细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺病毒Ad-mTERT.[结论]成功构建了小鼠TERT基因重组腺病毒载体,为研究其用于肿瘤的基因治疗奠定基础.