硫化氢通过抑制p38MAPK通路和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖引起的H9C2心肌细胞损伤和炎症

摘要

【目的】探讨外源性硫化氢(H2S)能否通过抑制p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)通路和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖引起的H9C2心肌细胞损伤和炎症。【方法】采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测心肌细胞的存活率;ELISA法检测细胞培养液中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)测定p38MAPK和RIP3蛋白(反映坏死性凋亡的指标)的蛋白水平;双氯荧光素染色荧光显微镜照相测定细胞内活性氧(ROS)水平;罗丹明123染色荧光显微镜照相测定线粒体膜电位(MMP)。【结果】H9C2心肌细胞经35 mmol/L葡萄糖(高糖,HG)作用24 h,胞内RIP3的蛋白水平明显增加,应用3μmol/L SB203580(p38 MAPK抑制剂)预处理心肌细胞60 min能明显地抑制HG对RIP3蛋白水平的上调作用;另一方面,HG可上调磷酸化(p)p38 MAPK的蛋白水平,应用100μmol/L necrostatin-1(Nec-1,坏死性凋亡的特异性抑制剂)共处理心肌细胞24 h能阻断HG对p-p38 MAPK蛋白水平的上调作用;而400μmol/L Na HS(为H2S的供体)预处理心肌细胞30 min能同时抑制HG对RIP3和p-p38 MAPK蛋白水平的上调作用。此外,400μmol/L Na HS、3μmol/L SB203580预处理或100μmol/L Nec-1共处理心肌细胞均可抑制HG引起的心肌细胞毒性、氧化应激、线粒体损伤和炎症反应,使细胞存活率升高,ROS生成、MMP丢失及IL-1β和TNF-ɑ的分泌水平减少。【结论】抑制p38 MAPK通路和坏死性凋亡的相互作用可能是外源性H2S对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症的重要作用机制之一。